sábado, 17 de marzo de 2012

4.4 REPLICACIÓN IN VITRO DEL ADN (PCR).


La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio que permite la copia in vitro de secuencias específicas de DNA y que ha revolucionado el campo de la Biología Molecular.

La PCR fue desarrollada por Kary Mullis (Saiki et al, 1985; Mullis, 1990) en 1985.

Para lograr la duplicación de un tramo de ADN, cada ciclo de la técnica PCR incluye tres etapas:

a) desnaturalización, durante la cual se separan las dos hebras constituyentes del ADN.
 b) apareamiento de los "iniciadores" o primers del tramo a replicar.
 c) extensión de las cadenas de primers gracias a la acción de una enzima ADN polimerasa. La repetición de los ciclos permite multiplicar geométricamente los tramos de ADN elegidos.


La gran ventaja de la PCR es que amplifica únicamente el fragmento de DNA que queremos aunque esté en cantidades mínimas (alta sensibilidad) o en presencia de grandes cantidades de otros DNA semejantes (alta especificidad). La reacción es eficaz incluso si se parte de muestras de DNA muy poco purificadas, en presencia de otros componentes.

Así, la PCR se ha convertido en una herramienta fundamental en campos tan diversos como la investigación (clonado de genes, detección de clones recombinantes, estudio de DNA de fósiles), medicina forense y criminalística (determinación de la paternidad, identificación de individuos, identificación sospechoso/evidencia en casos de asesinato, violación, etc.), sanidad animal y mejora genética (detección de enfermedades genéticas e infecciosas, pureza de razas, etc.) y medicina (diagnóstico de enfermedades).


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